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ABI_7500熒光定量PCR儀如何使用內(nèi)標(biāo)進(jìn)行質(zhì)量控制?
更新時間:2023-07-10   點擊次數(shù):1981次
   在ABI_7500熒光定量PCR儀實驗中,使用內(nèi)標(biāo)可以有效地進(jìn)行質(zhì)量控制,以下是使用內(nèi)標(biāo)進(jìn)行質(zhì)量控制的步驟:
 
  1.內(nèi)標(biāo)的設(shè)計和選擇:設(shè)計一個特異性的內(nèi)標(biāo)是第一步,這個內(nèi)標(biāo)可以是基因組上的一個特定序列或者是一個已知的基因。這個內(nèi)標(biāo)的長度應(yīng)該與待檢測的基因組序列相當(dāng),以便于在同時進(jìn)行PCR反應(yīng)時,可以擴(kuò)增出與待檢測基因組大小相同的產(chǎn)物。
 
  2.內(nèi)標(biāo)加入的比例:標(biāo)的比例應(yīng)該與待檢測的基因組序列相同。這可以通過在反應(yīng)體系中同時加入內(nèi)標(biāo)和待檢測的基因組序列的引物和探針來實現(xiàn)。
 
  3.內(nèi)標(biāo)的擴(kuò)增:內(nèi)標(biāo)應(yīng)該與待檢測的基因組序列同時擴(kuò)增。這可以通過在反應(yīng)體系中同時加入內(nèi)標(biāo)和待檢測的基因組序列的引物和探針來實現(xiàn)。
 
  4.內(nèi)標(biāo)的檢測:在結(jié)束后,通過熔解曲線分析產(chǎn)物,可以檢測內(nèi)標(biāo)是否正確地擴(kuò)增。如果內(nèi)標(biāo)擴(kuò)增出了正確的產(chǎn)物,那么說明實驗的質(zhì)量控制是有效的。
 
  5.內(nèi)標(biāo)的驗證:在進(jìn)行PCR實驗時,需要驗證內(nèi)標(biāo)的擴(kuò)增效果。這可以通過對一系列已知濃度的內(nèi)標(biāo)進(jìn)行PCR反應(yīng)來實現(xiàn)。如果內(nèi)標(biāo)的擴(kuò)增產(chǎn)物符合預(yù)期的熔解曲線,那么就可以確認(rèn)內(nèi)標(biāo)是有效的。
 
  6.內(nèi)標(biāo)的應(yīng)用:通過使用內(nèi)標(biāo),可以評估熒光定量PCR實驗的精密度和靈敏度。內(nèi)標(biāo)可以用于評估實驗中的變異系數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差,從而確定實驗的精密度。同時,通過使用內(nèi)標(biāo)還可以評估實驗的靈敏度,因為內(nèi)標(biāo)的濃度可以影響實驗的線性范圍和檢測下限。
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